Tuberculoza (TB) rămâne o ameninţare globală la adresa sănătăţii, cu 10 milioane de cazuri noi şi 1,7 milioane de decese anual. Conform ultimului raport al Organizaţiei Mondiale a Sănătăţii (OMS), TB este a 13-a cauză principală de deces şi a doua cauză de mortalitate infecţioasă după Covid-19. Infecţia tuberculoasă latentă (LTBI) este considerată un rezervor pentru bacteriile TB, iar subiecţii pot evolua spre TB activă. O treime din populaţia lumii este infectată cu TB şi, în medie, între 5 şi 10% dintre cei infectaţi cu LTBI vor dezvolta tuberculoză activă pe parcursul vieţii, de obicei în primii cinci ani de la infecţia iniţială.
O echipă de la Wayne State University, din Statele Unite, a descoperit o nouă tehnologie care poate detecta rapid şi uşor anticorpii infecţiei active cu Mycobacterium tuberculosis (TB).
Cercetarea lor a fost publicată într-o ediţie recentă a revistei Microbiology Spectrum.
Testele standard de aur pentru a determina dacă o infecţie este TB activă sunt testul frotiului de spută şi testul de cultură.
Aceste metode însă necesită recoltarea sputei, care durează, este costisitoare, necesită personal calificat şi nu este sensibilă.
Testele convenţionale actuale care diferenţiază LTBI de controalele neinfectate - cum ar fi testele cutanate cu tuberculină (TST) sau testul de eliberare a interferongamei (IGRA), nu fac diferenţa între infecţia TB activă şi TB latentă.
În ciuda progreselor înregistrate în tehnicile moleculare rapide pentru diagnosticarea TB, există o nevoie neacoperită pentru un test simplu, ieftin şi rapid, la punctul de îngrijire (POC), care să nu se bazeze pe spută.
Grupul de cercetare a lucrat timp de peste 15 ani la dezvoltarea tehnologiei de detectare a anticorpilor în diverse boli respiratorii.
Laboratorul a dezvoltat o nouă tehnologie care nu e bazată pe spută şi a descoperit mai mulţi noi epitopi imuni care se leagă în mod diferenţiat de imunoglobulina specifică (IgG) la subiecţii infectaţi cu TB.
Nivelurile de IgG specifice epitopilor din ser pot diferenţia TB activă de subiecţii cu LTBI, de controalele sănătoase şi de alte boli respiratorii.
Această tehnologie poate fi utilizată ca un test seric simplu, care nu se bazează pe spută, un test serologic POC- TB, care este foarte specific şi sensibil, pentru a diferenţia TB activă de LTBI.
„Anterior, am dezvoltat o platformă de afişare a antigenului bacteriofag (fag) T7 şi, după imunodetecţia unor seturi mari de probe de ser, am identificat 10 clone care se leagă diferenţiat de anticorpii serici (IgG) ai pacienţilor cu TB activă, diferenţiind TB de alte boli respiratorii", a declarat Samavati.
Crercetătorii au descoperit că una dintre clone de înaltă performanţă avea homologie cu enzima transcetolază (TKT) a bacteriei TB, care este o enzimă esenţială necesară pentru creşterea intracelulară a bacteriei într-o gazdă.
Astfel, ei au emis ipoteza că abundenţa de IgG în seruri împotriva noului neoantigen identificat, pe care l-au botezat TKTµ, poate face diferenţa între TB activă, LTBI şi alte boli pulmonare granulomatoase non-TB, cum ar fi sarcoidoza.
Astfel, echipa a dezvoltat un nou test ELISA peptidic direct pentru a cuantifica nivelurile de IgG în probele de ser faţă de TKTµ.
Ei au conceput alţi doi omologi peptidici M.tb-TKT care se suprapun, cu potenţial antigenic, care corespund transcetolazei specifice M.tb (M.tb-TKT1 şi M.tb-TKT3) şi, astfele, au standardizat trei teste ELISA peptidice (TKTμ, M.tb TKT1 şi M.tb TKT3) pentru serodiagnosticul TB.
După dezvoltarea şi standardizarea unui ELISA peptidic direct pentru trei peptide, echipa de cercetare a testat 292 de subiecţi, iar rezultatele arată că pacienţii cu TB au niveluri semnificativ mai mari de anticorpi specifici TKT în comparaţie cu pacienţii care au fost controale sănătoase şi cu LTBI.
Potrivit cercetătorilor, nivelurile crescute ale anticorpilor specifici TKT sunt probabil asociate cu bacteria M.tb în creştere la pacienţii cu TB activă.
TKT joacă un rol-cheie în trecerea de la faza de latenţă la cea proliferativă, iar IgG specifice TKT pot descoperi diferenţele dintre TB activă şi LTBI.
Astfel, serodiagnosticul TB bazat pe IgG cu ajutorul testului ELISA cu TKT-peptide este promiţător, spun specialiştii.
În prezent, testele serologice pentru TB disponibile în comerţ prezintă o sensibilitate şi o specificitate scăzute.
Rezultatele ELISA obţinute cu peptidele TKT descoperite de echipa Wayne State au dat o specificitate şi o sensibilitate ridicate. Rezultatele lor arată că anticorpii IgG împotriva transketolazei pot discrimina tuberculoza activă.
„Testul nostru ELISA cu peptide TKT necesită ca aceste peptide să fie sintetizate chimic pentru a acoperi găurile din placa ELISA, mai puţin de 100µl de probă de ser de sânge de la pacient, reactivi de detecţie şi un cititor de plăci ELISA", a declarat Samavati.
„Suntem extrem de entuziasmaţi de tehnologia pusă la punct şi de faptul că, un test simplu ca acesta, poate diferenţia TB activă de LTBI şi de alte boli respiratorii. Credem că metoda noastră şi testul ELISA cu peptida TKT pot corespunde cerinţelor OMS şi ale Centrelor pentru Controlul şi Prevenirea Bolilor (CDC) ca metodă de screening la punctul de îngrijire", a mai menţionat cercetătorul.
